PCR analiza: što je to? Kako ispravno preuzeti PCR test

Ne tako davno, razvijena je pouzdana, vrlo osjetljiva i brza metoda za dijagnozu različitih ljudskih zaraznih bolesti. Ova metoda se zove "PCR analiza". Što je ovo, u čemu

Povijest otkrića

Izumio lančana reakcija polimeraze (PCR), američki znanstvenik Cary Myullis 1983. izvorno patentiran dijagnostička metoda tvrtka "Cetus Corporation", u kojoj je radio njegov kreator. Ali 1992. godine, sva prava i patenti prodani su tvrtki "Hoffman-La Roche". Nakon toga, činilo se da su paralelne slične studije provedene i snimljene od strane drugih američkih biologa, kao što su Alice Chen, David Edgar, John Treel. Godine 1980. sovjetski znanstvenici A. Slyusarenko, A. Kaledin i S. Gorodetsky. Stoga je bilo nemoguće utvrditi jedinog nositelja prava. Mnogi izvrsni biokemičari pridonijeli su razvoju metode lančane reakcije polimeraze i patentirao njihove inovacije. U ovom trenutku, PCR analiza se provodi posvuda u posebno opremljenim laboratorijima.

Bit PCR dijagnostičke metode

PCR analiza: što je to i kako funkcionira? Bit metode je povećanje specifičnog mikrobnog medija pomoću posebnog enzima DNA polimeraze pod umjetnim uvjetima. Da biste to učinili, umnožite postojeći DNK-materijal. Dakle, u prisutnosti patogenog mikroorganizma u uzorku, njegova količina će se povećati biokemijskim laboratorijskim manipulacijama, a bakterija se ne može detektirati u mikroskopu.

Kako se provodi materijalno istraživanje?

Analiza zahtijeva:

• DNA predložak;
• primeri koji povezuju krajeve fragmenta materijala;
• termički stabilan enzim DNA polimeraze;
• kemijske tvari koje osiguravaju ispravno funkcioniranje enzima;
• pufersku otopinu potrebnu za stvaranje odgovarajućih uvjeta za rast i razvoj DNA materijala.

  

Za provedbu PCR provodi se 25-30 ponavljanja, koja se sastoji od tri faze: denaturacija, žarenja i produženja.

Za analizu lančane reakcije polimeraze koristi se poseban uređaj - pojačalo. Moderna oprema vam omogućuje da postavite potrebni program za grijanje i hlađenje cijevi kako biste eliminirali pogreške tijekom dijagnoze.

Gdje se koristi dijagnoza?

Metoda lančane reakcije polimeraze koristi se u različitim područjima medicine:

• Forenzični znanstvenici ga koriste za identifikaciju genetskog materijala, kao što su kosa, slina ili krv;
• PCR analiza krvi pomaže kod genotipizacije, na primjer, da bi se otkrila pojedina genetski modificirana reakcija na određeni lijek;
• uz pomoć takvog postupka utvrdi postojanje obiteljskih veza među ljudima;
• najpopularnija PCR metoda postala je u medicinskoj dijagnostici za definiranje raznih zaraznih bolesti.

Koje infekcije otkrivaju PCR?

Dakle, lijekovi su dugo i uspješno koristili analizu PCR-a. Što je to, već smo naučili. A koji patogeni mogu biti otkriveni s njom? PCR metoda dijagnosticira sljedeće zarazne bolesti:

• hepatitis A, B, C;
• ureaplasmosis;
• kandidijaza;
• klamidija;
• mikoplazmoza;
• bakterijska vaginoza;
• infektivna mononukleoza;
• trihomonijazu;
• infekcija papilomavirusom;
• tuberkuloze;
• herpes infekcija tipa 1 i 2;
• Helicobacter pylori infekcije;
• citomegalovirus;
• difterije;
• salmoneloze;
• HIV infekcija.

  

Također, PCR metode se koriste u dijagnozi raka.

Prednosti postupka

Dijagnoza PCR ima nekoliko prednosti:

1. Visoka osjetljivost. Čak i sa samo nekoliko DNA molekula mikroorganizma, PCR analiza određuje prisutnost infekcije. Metoda će pomoći u kroničnim i latentnim bolestima. Često u takvim slučajevima, mikroorganizam je neobrađen na druge načine.
2. Za studiju je prikladan bilo koji materijal, kao što su slina, krv, spol, kosa, epitelne stanice. Najčešći je krvni test i urogenitalni razmaz na PCR.

   

3. Ne zahtijeva dugoročno uzgoj usjeva. Automatizirani dijagnostički postupak omogućuje vam da dobijete rezultate studije nakon 4-5 sati.
4. Metoda je gotovo 100% pouzdana. Zabilježeni su samo pojedinačni slučajevi lažnog negativnog rezultata.
5. Sposobnost prepoznavanja nekoliko vrsta patogena iz jednog uzorka materijala. To ne samo da ubrzava proces dijagnosticiranja bolesti već i značajno smanjuje materijalne troškove. Često liječnik propisuje sveobuhvatnu PCR analizu. Cijena ispitivanja, koja se sastoji od definicije šest patogena, iznosi oko 1500 rubalja.

Preporuke za pripremu za analizu

Da bi rezultati bili pouzdani u PCR studiji, analiza bi se trebala provesti slijedeći preporuke za preliminarnu pripremu za dijagnozu:

1. Prije odustajanja od sline, trebali biste se suzdržati od uzimanja hrane i lijekova 4 sata prije uzimanja materijala. Neposredno prije postupka isperite usta kuhana voda.
2. Gore navedena pravila treba se pridržavati pri uzimanju uzorka s unutarnje površine obraz. Nakon ispiranja preporuča se lagana masaža kože kako bi se izolirala izlučivanje žlijezde.
3. Urin se obično bere kod kuće. Da biste to učinili, morate provesti temeljit WC genitalija. Potrebno je sakupiti 50-60 ml urina u sterilnom plastičnom spremniku. Da bi se osigurala čistoća materijala, preporuča se da žene ubace tampon u rodnicu, a muškarci maksimalno povlače kožu. Ne možete uzeti materijal tijekom menstrualnog protoka.
4. Za isporuku sperme, morate se suzdržati od seksualnog odnosa 3 dana prije no što uzmete materijal. Liječnici također savjetuju odbiti posjetiti saunu i uzimati vruću kupku, piti alkohol i začinsku hranu. 3 sata prije testa, morate se suzdržati od uriniranja.
5. Primjerice, za isporuku urogenitalnog premaza, ako se provede analiza na klamidijskom PCR-u, preporuča se i ženama i muškarcima da imaju seksualni odmor 3 dana. 2 tjedna prije testa, antibakterijski lijekovi se ne smiju uzimati. Za tjedan dana trebate prestati koristiti intimne gelove, masti, vaginalne supozitorije, štrcaljke. 3 sata prije testa, morate se suzdržati od uriniranja. Tijekom menstruacije, zbirka materijala se ne provodi, tek nakon 3 dana nakon prestanka krvarenja može se uzimati urogenitalni premaz.

PCR tijekom trudnoće

Razdoblje čekanja za bebe, mnoge zarazne bolesti, spolno prenosive bolesti, su krajnje opasni za normalan razvoj fetusa. Spolno prenosive bolesti mogu potaknuti intrauterini razvoj, spontani pobačaj ili prijevremeni porod, kongenitalne malformacije djeteta. Stoga je iznimno važno proći rani PCR test. Potrebno je dostaviti analizu prilikom registracije - do 12 tjedana.

Materijal je izvađen iz cervikalnog kanala s posebnim četkom. Postupak je bezbolan i ne predstavlja opasnost za dijete. Normalno vrijeme trudnoće analiziranog za klamidija PCR metode, kao i ureaplasmosis, mikoplazmoza, citomegalovirus, herpes, papiloma virusa. Takav kompleks ispitivanja naziva se PCR-6.

PCR za dijagnozu HIV-a

Budući da je metoda lančane reakcije polimeraze vrlo osjetljiva na promjene u tijelu i stanja dijagnoze, mnogi čimbenici mogu utjecati na rezultat. Stoga, PCR analiza HIV infekcije nije pouzdana metoda, njegova je učinkovitost 96-98%. U preostaloj 2-4% slučajeva, test daje lažne pozitivne rezultate.

Ali u nekim situacijama, HIV se ne može izbjeći bez PCR dijagnostike. Obično se primjenjuje na osobe s lažno negativnim rezultatom ELISA. Takvi pokazatelji upućuju na to da osoba još nije razvila antitijela na virus i ne mogu se otkriti bez višestrukog povećanja broja. To se može postići provođenjem krvi pomoću PCR metode.

Također, ova dijagnoza je nužna za djecu prve godine života koji su rođeni od HIV pozitivne majke. Metoda je jedini način da pouzdano utvrdite status djeteta.

PCR za dijagnozu hepatitisa

Metoda lančane reakcije polimeraze omogućava detekciju DNA virusa hepatitisa A, B, C mnogo prije stvaranja protutijela na infekciju ili pojave simptoma bolesti. Posebno je učinkovita analiza PCR-a za hepatitis C, budući da u 85% slučajeva takva bolest prolazi asimptomatski i bez pravodobnog liječenja prolazi u kroničnu fazu.

Pravovremeno otkrivanje patogena pomoći će u izbjegavanju komplikacija i produženog liječenja.

Iscrpno ispitivanje PCR-a

Kompleksna analiza PCR-a: što je to? Ovo je Ispitivanje polimezarnoy lančana reakcija postupak koji obuhvaća istovremeno određivanje nekoliko vrsta infekcije Mycoplasma: genitalium djelovima, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, citomegalovirus, ureaplazma urealichyum, herpes prve i druge vrste, gonoreja, papiloma virus. Cijena takve dijagnostike kreće se od 2000 do 3500 rubalja. ovisno o klinici, korištenim materijalima i opremi, te o vrsti analize: kvalitativno ili kvantitativno. Što je potrebno u vašem slučaju - liječnik će odlučiti. U nekim slučajevima, dovoljno je samo utvrditi prisutnost patogena, dok kod drugih, na primjer, kod infekcije HIV-om važnu ulogu ima kvantitativni titar. Kada dijagnosticira sve gore navedene patogene, test se naziva "PCR-12 analiza".

Objašnjenje rezultata analize

Dekodiranje PCR analize nije teško. Postoje samo dvije razine indikatora - "pozitivni rezultat" i "negativni rezultat". Ako se otkrije patogen, liječnici mogu potvrditi prisutnost bolesti s 99% pouzdanosti i nastaviti s liječenjem pacijenta. U kvantitativnoj metodi određivanja infekcije u odgovarajućem stupcu bit će naznačena numerička vrijednost otkrivenih bakterija. Samo liječnik može utvrditi stupanj bolesti i propisati potrebne tretmane.

U nekim slučajevima, na primjer, pri određivanju HIV infekcije PCR-om, ako je rezultat negativan, postaje potrebno provesti dodatna ispitivanja kako bi se potvrdili rezultati.

Gdje poduzeti analizu?

Gdje mogu uzeti PCR analizu: u državnoj poliklinici ili u privatnom laboratoriju? Nažalost, u općinskim medicinskim ustanovama, oprema i metode često su zastarjeli. Stoga je bolje davati prednost privatnim laboratorijima s modernom opremom i visoko kvalificiranim osobljem. Osim toga, u privatnoj klinici dobit ćete mnogo brže rezultate.

U Moskvi, mnogi privatni laboratoriji nude PCR analizu za različite infekcije. Na primjer, u klinikama kao što su Vita, kompleksna klinika, sretna obitelj i Uro-Pro, provodi se PCR analiza. Cijena ispitivanja iznosi 200 rubalja. za definiranje jednog patogena.

Može se zaključiti da je dijagnoza zaraznih bolesti PCR metodom u većini slučajeva brza i pouzdana metoda otkrivanja patogena u tijelu u ranoj fazi infekcije. No, u određenim slučajevima valja odabrati druge metode dijagnoze. Potreba za provođenjem takve studije može odrediti samo stručnjak. Dekodiranje PCR analize također zahtijeva profesionalni pristup. Slijedite preporuke liječnika i ne dajte sebi testove koji nisu potrebni.