Što su tinktorska svojstva?

Prije proučavanja mikroorganizama pod mikroskopom, uzorak koji se proučava podvrgava se posebnoj pripremi. U prirodnom obliku, gotovo sve bakterije su prozirne, pa su obojene bojama. Bojenje omogućuje određivanje morfoloških svojstava mikroba pod istragom i njihovo pripadanje jednoj ili drugoj vrsti. Sposobnost mikroorganizama da percipiraju boje naziva se tinktorska svojstva. Pomoću njihove pomoći, biolozi određuju vrstu mikroba, njegove parametre, svojstva struktura, te identificiraju patogene zaraznih bolesti. Iz ovog članka detaljno ćete saznati da su to tinktorska svojstva, a također kako se koriste u znanosti.

Zadaci koje metoda bojanja rješava

Prije svega, doznajemo što je značenje tinktorskih svojstava mikroorganizama. Bojanje uzorka je jedna od ključnih tehnika mikrobiologije, koja omogućuje proučavanje vanjske i unutarnje strukture organizama. Bakterije su prozirni mikroorganizmi koji reflektiraju svjetlosne zrake. Stoga se u običnoj mikroskopiji ne mogu smatrati. Različiti dijelovi bakterija međusobno se miješaju s bojom. Tinktorska svojstva izvrsna su prilika za istraživače. Budući da se razlikuju u različitim mikroorganizmima, dopuštaju nam da odredimo njihove najvažnije karakteristike: oblik, veličinu, strukturu, lokaciju i tako dalje.

Priprema uzorka i njegovo bojenje

Bez obzira na tehniku ​​bojenja koju istraživač prakticira, ovaj postupak sastoji se od nekoliko obveznih koraka:

1. Priprema uzorka. U kapljici vode koja se postavlja na klizač, ispitivani materijal se uvodi pomoću bakteriološke petlje.
2. Sušenje mrlja. To se provodi na sobnoj temperaturi, ili u toku toplog zraka (ali ne previše blizu izvora topline).
3. Fiksacija. Podrazumijeva fiksiranje mikroorganizama na staklo, kako bi se poboljšala njihova osjetljivost na bojenje.
4. Bojanje. Boja se nanosi na ispitni uzorak i ostavi stajati neko vrijeme. Zatim se ostatci boja uklone i uzorak se ispere s vodom.
5. Sušenje. Posljednja faza, koja vam omogućuje da se riješite ostataka vode nakon ispiranja. Nakon sušenja, uzorak je spreman za ispitivanje pod mikroskopom.

Uobičajene boje

Bojenje uzoraka provodi se uz pomoć anilinskog bojila, s različitim indeksom kiselosti (pH). Podijeljene su na: osnovne (stres na drugom slovu o), kiseline i neutralne.

U osnovnim bojama agens koji djeluje je kation. Uz pomoć raznih reagensa moguće je dobiti različite boje bojenja mikroba:

1. Crveno - pironi, safranin, neutralni i magenta osnovni.
2. Violet - tionin, metil, gentian i kristalna ljubičasta.
3. Plava je metilen plava i Victoria.
4. Zeleno - malakit i metilen zelje.
5. Crna je indulin.
6. Smeđa je vesuvin i krizoid.

U kiselim bojama anion je pričvršćen na svojstva bojanja. Od ovih, najčešći su:

1. Crveno kiselo fuchsin i eosin.
2. Crni je nigrozin.
3. Žuta je pikronična kiselina.

Neutralne boje mogu obojiti anione i katione. Kao primjetan primjer ovih može se nazvati rodamin V.

Postojeće metode bojanja, na temelju bojom mikroorganizama, mogu se podijeliti u tri glavne vrste: vitalni, postvitalny i bojanjem spora. Mi ćemo se pobrinuti za svaki od tih metoda detaljnije.

Na vitalan način

Ova metoda se također naziva intravitalna, stoga se bojenje provodi za mikroskopiranje živih organizama. Uvođenje lijeka za bojanje omogućuje proučavanje obilježja unutarstaničnih struktura i tkiva. Postoje i metode vitalnog bojenja, što ukazuje na ubijanje uzorka odmah nakon bojenja.

Za intravitalno bojenje koriste se posebne boje koje su karakterizirane niskom toksičnošću i visokom penetracijskom snagom. Osim vitalnih priprema, fluorokromi ili fluorescentne boje koriste se i za rješavanje ovog problema.

Posturalni način

Za razliku od prethodne verzije, ovdje se bojenje izvodi nakon ubijanja mikroorganizama. Metode post-bojenja podijeljene su u jednostavne i složene. Jednostavno može odrediti morfološka svojstva ispitivanih organizama: oblik, veličina, mjesto i mjesto. Kompleksne metode su usko fokusirane i omogućuju dobivanje informacija o strukturi mikroorganizma. Najčešće, složene metode bojanja nose imena svojih kreatora. Od ovih su najpopularnije sljedeće metode.

Gramova metoda. Metoda, razvijena krajem 19. stoljeća, temelji se na diferencijaciji mikroba iz propusnosti staničnih zidova. Uz pomoć anilinskih boja (gentian violet ili methyl) i naknadnog pranja, istraživač prima dvije vrste klica: Gram-pozitivne (karakteristične plave boje) i Gram-negativne (osigurane). Kako bi se postigla potpuna slika, crvena boja se također koristi, nakon tretmana, čak i gram-negativni mikroorganizmi dobivaju boju - od ružičaste do crvene boje.

Gramova metoda dopušta klasificiraju mikrobe i izvršiti njihovo odvajanje prema tinktorskim svojstvima. Ovo je jedna od najjednostavnijih i najčešćih metoda pripreme uzorka za mikroskopiju. Primijenjena vrijednost ove tehnike je dijagnosticirati različite zarazne bolesti.

Metoda Tsile-Nielsen. Ova je metoda također razvijena krajem XIX. Stoljeća. Temelji se na određivanju kisele otpornosti bakterija bojanjem. Ovom metodom, zbog tinktorskih svojstava mikroorganizama, moguće je identificirati patogene tuberkuloze, gube i mikobakterija.

The Romanovsky-Giemsa metoda. Ova je metoda razvijena već početkom dvadesetog stoljeća. Njegova suština je u tome da nakon bojenja uzorka posebna boja acidophilus steći različite nijanse crvene i bazofili - od ljubičaste do plave.

Acidofili nazivaju mlijeko i bakterija octene kiseline, za život u kojem je potrebna niska kiselost medija. Basofili su mikrobi koji se mogu obojiti s osnovnim bojama. Prema tome, metoda se temelji na odvajanju mikroorganizama od vrijednosti kiselosti medija. Široko se koristi za proučavanje morfologije protozoe i spiroheta.

Metoda Burry-Hins. Omogućuje određivanje prisutnosti bakterija u kapsulama.

Morozovova metoda. Ova metoda obojenja omogućava vidljivost flagele bakterija. Za to je potrebno izvršiti takve manipulacije:

1. Uzorak uzorka s kiselinom da se flagella oslobodi.
2. Popraviti opuštenu tkaninu taninom.
3. Uzorak uzoraka srebrnim nitratom.

Kao rezultat toga, bakterija, sa svojom flagella, postaje vidljiva. Njegova boja može se kretati od žute do smeđe boje.

Sporedno bojenje

Tinktorska svojstva mikroorganizama omogućuju, uz pomoć bojanja, uočavanje njihovih spora. Zbog toga se najčešće koristi tehnika Tsilya-Nilson. Njegova suština sastoji se u obradi ispitivanog uzorka sa fuchsin Tsilom i njegovom daljnjem obezbojenju uz pomoć 1% sumporne kiseline. Kao rezultat, spore su obojene ružičastim i dobro se izdvajaju u pozadini plavih bakterija.

Kako bi vidjeli sliku spora, Orzeszkoova tehnika također dopušta. Prema ovoj metodi, školjke spora prvi su urezane na visokoj temperaturi s kiselinom, a zatim se koristi Ziehl-Nilson bojanje.

Strukturne značajke mikroba

Stanica mikroorganizma se obično sastoji od stijenki (ljuske), citoplazmatske membrane, citoplazmi, sadrže u svom sastavu i uključujući nukleotida. Neke vrste mikroba također posjeduju flagella, pili ili ciliju, te mogu stvarati kapsule ili spore.

Školjka mikroorganizma određuje njegov oblik i štiti ga od nepovoljnih uvjeta okoline i osmotskog unutarnjeg tlaka. Zidovi mikroba imaju prilično složeni kemijski sastav i strukturu. U Gram-pozitivnim i Gram-negativnim stanicama se razlikuju. Prvi su debeli stanični zid koji sadrže teekonske kiseline i nekoliko lipida. Zid drugog sastoji se od njihovih polipeptidnih i polisaharidnih slojeva.

Vani je stanična stijenka prekrivena sluznim slojem. U nekim mikroorganizmima može se povećati (nabubriti) formiranje kapsule koja se uglavnom sastoji od polisaharida, ponekad i polipeptida. Ne reagira na bojenje. Zato se takvi mikrobovi proučavaju metodom Burri-Hins. U nekim patogenima (na primjer, pneumokok), kapsula se stvara samo u organizmu životinja ili ljudi.

U studiji mikroba pod mikroskopom pažnja je također privučena bojenju citoplazme i njegovih struktura. Citoplazma se mogu homogeno (homogeno) ili heterogeno bojati (uključene su inkluzije organske ili anorganske prirode). Za proučavanje inkluzija koriste se posebne metode bojenja (na primjer, prema Neisseru). Dodatno, prisutnost jezgre ili nukleotida određena je u citoplazmi.

Saznajući da su to tinktorska svojstva i kako oni pomažu u mikroskopiji, razmotrit ćemo značajke nekih uobičajenih mikroba.

streptokoke

S gledišta tinktorskih svojstava, streptokoki su Gram-pozitivni mikroorganizmi, pa se određuju Gram metodom. Najsvjetlija boja ovih bakterija javlja se kada je izložena plavom Lafferu. Struktura njihovih stanica sliči lancu.

salmonele

Oni su fakultativni anaerobni, od kojih su većina pokretni zbog prisutnosti flagele. Na gustom mediju hranjivih tvari, salmonele se skupljaju u okrugle bijelo-sive kolonije. Spor se ne formira, ima peritrichs i mikrokapsule. Poput streptokoka, salmonele su obojene Gram metodom. Razlika leži u činjenici da su tinktorska svojstva salmonele gram-negativna.

Meningococcus

Imaju zaobljeni polimorfni oblik. Na hranjivom mediju nalaze se u paru. Tinktorska svojstva meningokoka su takva da su gram-negativna, ali ne reagiraju jasno na Gram bojanje. Neravnomjerna boja je zbog činjenice da što je starija stanica, to su slabiji njezini tinktorski svojstva. Flagellum nema meningokoka, ali ne tvori spore.

Kolera Vibrio

Ovaj mikrob ima jedan polarni flagelum, koji je opremljen omotačem i valovitom membranom. Kolera vibrio ima izraženu mobilnost. Karakterizira ga polimorfizam. Tinktorska svojstva kolere vibrio uzrokuju njegovo bojenje anilinskim bojilima. U pravilu, to je voda fuchsin Pfeifer ili karbolni fuchsin Shlya.

E. coli

To je opcionalni anaerob koji ne tvori spore. Stanice su u obliku šipki sa zaobljenim krajevima. Tinktorska svojstva Escherichia coli to nose gram-negativnih bakterija. Napetosti bakterija s peri-trichally located flagella mogu se kretati.

neutrofili

Ovo ime dobilo je mikrobe zbog svojih tinktorskih svojstava. Neutrofili se mogu intenzivno bojati prema Romanovsky metodi, obje osnovne boje i kiseli eozin. Odrasle bakterije imaju segmentiranu jezgru, što znači da pripadaju polimorfonuklearnim stanicama. Oni su obdareni ljepljenjem, mobilnošću i sposobnošću kemotaksije i hvatanja čestica. Zajedno s bazofilima i eozinofilima pripada granulocitima.

bazofili

Analogno ranijim mikroorganizmima, ove su bakterije dobile svoje ime zbog tinktorskih svojstava. Basofili su intenzivno obojeni glavnom bojilom i nisu potpuno obojeni kiselim eozinom. Imaju velike granulocite i sadrže puno: histamin, serotonin, prostaglandine, leukotriene i druge medijatore upalnih i alergijskih procesa.

eozinofila

Za razliku od dva prethodna granulocita, ovi mikrobi intenzivno su obojeni samo kiselom bojom i nisu obojeni glavnim pripravcima. Eozinofili su obdareni sposobnošću ekstravazacije, kemotaksije i amoeboidnog kretanja. Oni mogu apsorbirati i vezati brojne medijatore upalnih i alergijskih reakcija.