Bakteriološka metoda istraživanja: faze, ciljevi, karakteristike

Proučavanje bakterija je od velike praktične važnosti za čovjeka. Do danas je otkriven veliki broj prokariota, koji se međusobno razlikuju u patogenosti, distribuciji, obliku, veličini, broju flagella i drugim parametrima. Da bi detaljnije proučavali ovu vrstu, koristi se bakteriološka metoda.

Koje su metode za analizu bakterijskih stanica?

Kako bi se utvrdilo jesu li bakterije patogene, kultura se ispituje na različite načine. Među njima:

1. Bakterioskopska metoda.

2. Bakteriološka metoda.

3. Biološka metoda.

Bakterioskopske i bakteriološke metode istraživanja temelje se izravno na radu s prokariotskim stanicama, kada je potrebna biološka analiza za proučavanje učinka takvih stanica na živi organizam pokusnih životinja. Prema stupnju manifestacije određenih znakova bolesti, znanstvenik može zaključiti o prisutnosti ili odsutnosti patogenih bakterija u uzorku, te ih prirodno umnožiti u životinjskom organizmu kako bi se dobila njihova kultura i upotreba u drugim djelima.

Bakteriološka metoda istraživanja razlikuje se od bakterioskopske metode. U prvoj, za analizu se koristi posebno pripremljena kultura živih prokariota, a druga radi s mrtvim ili živim stanicama na slajdu.

Faze bakteriološke metode ispitivanja. mikrobiologija

Princip proučava svojstva bakterijske kulture može biti korisno za mikrobiologa, znanstvenika koji je krenuo istraživati ​​prokariotske stanice, kao i za laboratorij, čiji je zadatak utvrditi patogene ili ne-patogene bakterije, a zatim dijagnozu pacijenta.

Metoda proučavanja bakterija podijeljena je u tri faze:

1. Izolacija bakterija iz izvornog uzorka.

2. Sjetva bakterija i uzgoj čiste kulture, proučavanje njegovih svojstava.

3. Detaljna studija bakterijskih stanica.

Prva faza

Uzorak, ili razmaz, uzima se sa slobodne površine medija ili pacijenta. Dakle, dobivamo "koktel" iz raznih vrsta bakterija koje se moraju sijati na hranjivi medij. Ponekad postaje moguće identificirati odmah potrebne bakterije, znajući svoje žarište raspodjele u tijelu.

Nakon dva do tri dana odabrane su kolonije i stavljene na kruti medij Petrijeva posuda uz pomoć sterilne petlje. Mnogi laboratoriji rade s epruvetama, gdje mogu biti prisutni čvrsti ili tekući hranjivi medij. Tako je i bakteriološka metoda istraživanja mikrobiologije.

Druga faza

Nakon dobivanja pojedinačnih kolonija bakterija provodi se izravna makro i mikroanaliza. Određuju se svi parametri kolonija, određuju se boja i oblik svakog od njih. Često se vrši brojanjem kolonija na Petrijevu posudu, a potom u početnom materijalu. Ovo je važno u analizi patogenih bakterija, na čiji broj ovisi o stupnju bolesti.

Bakteriološka metoda istraživanja, čija je druga faza ispitivanje pojedinačnih kolonija mikroorganizama, može se povezati s biološkom metodom bakterijske analize. Drugi cilj rada u ovoj fazi jest povećati količinu izvornog materijala. Može se izvesti na hranjivom mediju, a moguće je provesti eksperiment in vivo u živim eksperimentalnim organizmima. Patogene bakterije će se umnožiti, a kao rezultat, krv će sadržavati milijune prokariotskih stanica. Iz uzimane krvi, lako je pripremiti potrebni radni materijal bakterija.

Treća faza

Najvažniji dio studije je određivanje morfoloških, biokemijskih, toksigenskih i antigenskih svojstava bakterijske kulture. Rad se obavlja prethodno "pročišćenim" kulturama na hranjivom mediju, kao i preparatima (često u boji) pod mikroskopom.

Kako bi se identificirala pripadnost patogenih ili uvjetno patogenih bakterija na određenu sustavnu skupinu, a također određuje njihovu otpornost na lijekove, omogućava se bakteriološka metoda istraživanja. Faza 3 - antibiotici, tj. Analiza ponašanja bakterijskih stanica u uvjetima lijekova u okolišu.

Proučavanje otpornosti kulture na antibiotik ima veliku praktičnu važnost kada je potrebno propisati određeni pacijent potrebne i najvažnije učinkovite lijekove. Ovdje i bakteriološka metoda istraživanja mogu pomoći.

Što je hranjivi medij?

Za razvoj i reprodukciju bakterija treba biti unaprijed pripremljena hranjivim medijima. Po dosljednosti mogu biti tekući ili kruti, i podrijetlom - povrćem ili životinjom.

Osnovni zahtjevi za hranjive tvari:

1. Sterilnost.

2. Maksimalna transparentnost.

3. Optimalna kiselost, osmotski tlak, aktivnost vode i drugih bioloških količina.

Priprema izoliranih kolonija

1. Drigalskyova metoda. Sastoji se od toga da se bakterijska petlja nanosi s različitim premazom vrste mikroorganizama. Ova se petlja izvodi na prvom Petrijevu zdjelu s hranjivim medijem. Nadalje, bez mijenjanja petlje, postupak ostatnog materijala provodi se na drugoj i trećoj ploči Petrija. Dakle, na posljednjim uzorcima kolonije, bakterije neće biti previše uzgojene, čime se pojednostavljuje mogućnost pronalaženja bakterija potrebnih za rad.

2. Kochova metoda. Koristi cijevi s rastopljenim medijem hranjivih tvari. Stavlja se petlja ili pipeta s bakterijom, nakon čega se sadržaj cijevi ulijeva na posebnu ploču. Agar (ili želatina) zamrzava se nakon nekog vremena, au svojoj debljini je lako pronaći potrebne kolonije stanica. Važno je prije početka razrjeđivanja mješavine bakterija u epruveti, tako da koncentracija mikroorganizama nije veoma velika.

Bakteriološka metoda istraživanja, koja se temelji na izolaciji željene bakterijske kulture, ne čini bez ovih dviju metoda pronalaženja izoliranih kolonija.

antibiotikogrammy

Vizualno se reakcija bakterija na droge može vidjeti na dva praktična načina:

1. Način papira za diskove papira.

2. Razrjeđivanje bakterija i antibiotika u tekućem mediju.

Metoda papirne disk zahtijeva kulturu mikroorganizama koji su uzgojeni na čvrstom hranjivom mediju. Na tom mediju stavljaju se nekoliko okruglih papira, impregniranih antibioticima. Ako se lijek uspješno bori s neutralizacijom bakterijske stanice, Nakon takvog liječenja bit će mjesto bez kolonija. Ako je reakcija na antibiotik negativna, bakterije će preživjeti.

U slučaju korištenja tekućeg hranjivog medija prvo se priprema nekoliko epruveta s kulturom bakterija različitog stupnja razrjeđivanja. Antibiotici su dodani u ove cijevi, a tijekom dana promatraju proces interakcije tvari i mikroorganizama. Konačno, dobiva se kvalitativni antibiotik, od kojeg se može ocijeniti učinkovitost lijeka za određenu kulturu.

Glavni zadaci analize

Ovdje su navedeni ciljevi i faze bakteriološke metode istraživanja.

1. Dobiti izvorni materijal koji će se koristiti za izolaciju bakterijskih kolonija. Može biti mrlje s površine bilo kojeg objekta, sluznice ili šupljine ljudskog tijela, test krvi.

2. Uzgoj kulture na čvrstom hranjivom mediju. Nakon 24-48 sati na zdjelici Petri možete pronaći kolonije bakterija različitih vrsta. Odabiremo potrebne morfološke i / ili biokemijske kriterije i obavljamo daljnji rad s njom.

3. Reprodukcija dobivene kulture. Bakteriološka metoda istraživanja može se temeljiti na mehaničkom ili biološkom načinu povećanja broja bakterijskih kultura. U prvom slučaju, rad se provodi s krutim ili tekućim nutrientnim medijima na kojima se bakterije množe u termostatu i tvore nove kolonije. Biološka metoda zahtijeva prirodne uvjete za povećanje broja bakterija, pa je testirana životinja ovdje zaražena mikroorganizmima. Nekoliko dana kasnije, puno prokariota može se naći u uzorku krvi ili razmazivanju.

4. Radite sa pročišćenom kulturom. Da bi se utvrdio sustavni položaj bakterija, kao i njihovu pripadnost patogenima, potrebno je provesti temeljitu analizu stanica prema morfološkim i biokemijskim svojstvima. Kod ispitivanja patogenih skupina mikroorganizama, važno je znati koliko je djelotvorno djelovanje antibiotika.

Ovo je bila opća karakteristika bakteriološke metode ispitivanja.

Značajke analize

Glavno pravilo provođenja bakteriološkog istraživanja je maksimalna sterilnost. Ako je u tijeku rad s epruvetama, kulture i transplantacije bakterija trebaju se izvoditi samo preko zagrijanog duha.

Sve faze bakteriološke metode ispitivanja zahtijevaju uporabu posebne petlje ili Pasteurove pipete. Oba instrumenata moraju biti prethodno obrađena u plamenu duhovne svjetiljke. Što se tiče Pasteurove pipete, prije termičke sterilizacije potrebno je probiti vrh pipete pincetom.

Tehnika sjetve bakterija također ima svoje osobine. Prvo, kada sjetite na čvrstim medijima, izvodite bakterijsku petlju preko površine agara. Petlja, naravno, već mora imati uzorak mikroorganizama na površini. Također se prakticira sijati unutar medija kulture, u kojem slučaju petlja ili pipeta moraju dosegnuti dno Petrijevog jela.

Kod rada s tekućim medijem koriste se cijevi. Važno je osigurati da tekućine ne dodiruju rubove laboratorijskog stakla ili pluta, a korišteni instrumenti (pipeta, petlja) ne diraju strane objekte i površine.

Važnost biološke metode istraživanja

Analiza uzorka bakterija ima svoju praktičnu primjenu. Prije svega, bakteriološka metoda istraživanja može se koristiti u medicini. Na primjer, potrebno je proučiti pacijentovu mikroflora kako bi se ustanovila ispravna dijagnoza, a također i ispravno tijek liječenja. Ovdje pomaže antibiotikogram koji će pokazati aktivnost lijekova protiv uzročnika bolesti.

Analiza bakterija se koristi u laboratoriju za određivanje takvih opasnih bolesti kao što su tuberkuloza, ponavljajući tifus ili gonoreja. Također se koristi za proučavanje bakterijskog sastava tonzila, šupljina organa.

Bakterijska metoda istraživanja može se koristiti za određivanje onečišćenja okoliša. Prema kvantitativnom i kvalitativnom sastavu premaza na površini objekta, stupanj populacije ovog medija određuje se mikroorganizmima.