Mikrobiološke metode za proučavanje vode, tla, zraka

Mikroorganizmi su najmanji, uglavnom jednostanični stvorovi, rašireni u prirodi. Nalaze se u svim sredinama (zrak, tlo, voda), ljudi i životinja, u biljkama.

Kvaliteta raznolikosti i broj mikroorganizama ovise prvenstveno o prehrambenim spojevima. Međutim, također su važni i vlažnost, temperaturni režim, aeracija, djelovanje sunčevih zraka i drugih čimbenika.

Metode sanitarno-mikrobiološkog istraživanja prirodni mediji mogu otkriti prisutnost patogenih mikroorganizama, odrediti njihov broj i, sukladno dobivenim rezultatima, razviti mjere za uklanjanje ili sprečavanje zaraznih bolesti. Osim toga, kvantitativno računovodstvo je neophodno za modeliranje ekosustava i razvoj načela za upravljanje prirodnim procesima. Razmotrimo dalje što se događa metode mikrobiološkog istraživanja.

tlo

Znanstvenici ga smatraju jednim od mogućih načina prijenosa zaraznih patologija. S izolacijom bolesnih ljudi ili životinja, patogeni mikroorganizmi prodiru u tlo. Neke od njih, osobito spora, mogu dugo ostati na zemlji (ponekad nekoliko desetaka godina). U tlu ulaze u patogene takvih opasnih infekcija kao tetanus, antraks, botulizam itd. Metode sanitarno-mikrobiološke studije tla dopustiti odrediti "broj mikroorganizama" (broj mikroorganizama u gramu tla), kao i količinsko indeks (broj E. coli).

Analiza tla: opće informacije

K metode mikrobiološkog ispitivanja tla Prije svega izravnu mikroskopiju i sijanje na gustu nutrientni medij. Populacije mikroorganizama i njihovih skupina koje nastanjuju tlo razlikuju se po svojem taksonomskom položaju i ekološkim funkcijama. U znanosti su ujedinjeni pod općim pojmom "biota tla". Grunt je stanište velikog broja mikroorganizama. Gram tla sadrži od 1 do 10 milijardi njihovih stanica. U ovom okruženju dolazi do raspada organskih tvari uz sudjelovanje različitih saprofitskog mikroorganizama.

Mikroskopska metoda mikrobiološkog istraživanja: faze

Analiza okoliša počinje uzorkovanjem. Da biste to učinili, koristite prethodno očišćen i trljan nož s alkoholom (možete koristiti lopatu). Nakon toga se priprema uzorak. Sljedeći korak je brojanje stanica na mrljama. Razmotrimo svaku fazu zasebno.

uzimanje uzorka

Kod analize obradivog tla, u pravilu se uzimaju uzorci iz dubine cijelog sloja. Prvo uklonite 2-3 cm od vrha tla, jer može sadržavati stranu mikroflora. Nakon toga, monoliti su uzeti iz proučavanog mjesta tla. Duljina svake od njih bi trebala odgovarati debljini sloja od kojeg treba uzeti uzorak.

Na mjestu od 100-200 četvornih metara. m, uzeti su 7-10 uzoraka. Težina svake od njih iznosi oko 0,5 kg. Uzorke treba temeljito miješati u vrećici. Nakon toga uzmite prosječni uzorak težine oko 1 kg. Treba ga staviti u pergamentnu (sterilnu) vrećicu, ugrađenu u vrećicu za tkivo. Prije izravne analize, uzorak se čuva u hladnjaku.

Priprema za istraživanje

Mješovita tla se izlije na suhu staklo. Preliminarno se mora utrljati s alkoholom i spaliti preko plamenika. Pomoću lopatice, tlo se temeljito izmiješati i ravnomjerno položiti. Bez neuspjeha potrebno je ukloniti korijene, druge nepoželjne elemente. Za to se koriste pincete. Prije rada, pincete i lopatice kalcinirane su preko plamenika i ohlađene.

Iz malih dijelova tla raspoređenih na staklo uzimaju se mali dijelovi. Oni se vagaju u porculanskoj čaši na tehničkoj razini. Obavezna faza mikroskopskih metoda mikrobiološkog istraživanja je posebna obrada uzoraka. Unaprijed je potrebno pripremiti 2 sterilna tikvica. Njihov kapacitet ne smije prelaziti 250 ml. 100 ml vode iz slavine ulijeva se u jednu od bočica. Od nje se potrebno 0,4-0,8 ml tekućine i navlažiti uzorak tla u pastu. Mješavina se mora utrljati prstom ili gumenim štipaljkom 5 minuta.

S vodom iz prve tikvice, masa tla se prenosi u prazne tikvice. Zatim je ponovno utrljano. Nakon toga masa se prenese u tikvicu blizu plamena plamenika. Spremnik s suspenzijom tla potresan je na kotaču 5 minuta. Nakon toga se ostavi da se podigne oko 30 sekundi. To je neophodno kako bi se velike čestice mogle naseliti. Nakon pola minute, masa se koristi za pripremu pripravka.

Brojenje stanica na fiksnim mrljama

Izravna mikroskopska studija tla provodi se metoda mikrobiološkog istraživanja, koju je razvio Vinogradsky. U određenom volumenu pripremljene suspenzije broji se broj mikroorganizama. Proučavanje fiksnih razmaza omogućuje dugoročno spašavanje lijekova i izračunavanje u bilo kojem prikladnom trenutku.

Priprava lijeka je kako slijedi. Određena količina guste otopine (obično 0,02-0,05 ml) se nanosi, na mikropipete klizača. U ovu otopinu se doda kap agar-agar (polisaharide agaropectin smjesu i ekstrahirana s agaroza smeđe crvene alge Crno more), te brzo miješa se prostiru na površini 4-6 kvadratnih. vidi Oznaka se suši u zraku i fiksira 20-30 minuta. alkohol (96%). Zatim se lijek navlažen s destiliranom vodom i stavi se u p-p karboličan eritrozin 20-30 min.

Nakon bojenja, ispire se i osuši se u zraku. Stanice se broje s ciljem uranjanja.

Sjetva na gustim medijima

mikroskopski metode mikrobiološkog istraživanja može otkriti veliki broj mikroorganizama. Ali, usprkos tome ovo, metoda sjetva se smatra najčešćom praksom. Njegova bit sastoji se od sjetve volumena pripravka (suspenzija tla) u Petrijevom jelu na gustu mediju.

ovo metoda mikrobiološkog istraživanja omogućuje nam da uzmemo u obzir ne samo količinu, već i grupnu kompoziciju, au nekim slučajevima i sastavu vrsta mikroskopske flore. Broj brojeva kolonija je, u pravilu, načinjen od dna Petrijeve posude u prenesenom svjetlu. Na brojanoj sekciji točka se postavlja markerom ili tintom.

Analiza vode

Mikroflora vodenog tijela, u pravilu, odražava mikrobiološki sastav tla oko njega. U tom smislu, metode sanitarne i mikrobiološke studije vode i tla imaju posebnu praktičnu vrijednost u proučavanju stanja određenog ekosustava. Svježe ribnjake sadrže, u pravilu, cocci, štapićaste bakterije.

Anaerobni spojevi u vodi nalaze se u malim količinama. U pravilu, oni se reproducirati na dnu spremnika, u mulju, sudjelujući u procesima pročišćavanja. Mikroflora oceana i mora predstavlja uglavnom bakterije koje vole soli (halofilne).

Gotovo nema umjetničkih bunara mikroorganizama u vodi. To je zbog sposobnosti filtriranja sloj tla.

općeprihvaćenih metode mikrobiološkog istraživanja voda razmatra se određivanje mikrobnog broja i količina kolitisa ili kolika. Prvi pokazatelj karakterizira broj bakterija u 1 ml tekućine. Kolijevka indeksa je broj E. coli prisutnih u litru vode, a kolit-titar je minimalna količina ili maksimalno razrjeđivanje tekućine u kojoj se još mogu otkriti.

Određivanje mikrobnog broja

Ova metoda sanitarnih mikrobioloških istraživanja vode je kako slijedi. U 1 ml vode se određuje broj mezofilnih i fakultativne anaerobe (srednji) aerobnim sposoban za meso peptona agaru (primarni medij) pri 37 ° C. tijekom dana kako bi se formirale kolonije, vidljive s povećanjem od 2-5 r. ili golim okom.

Ključni stadij metoda mikrobiološkog istraživanja voda sjetva. Od svakog uzorka posijano je najmanje 2 različita volumena. Prilikom analize vode iz slavine dodano je 1-0.1 ml čiste tekućine u svaku čašu i 0.01-0.001 ml kontaminirane tekućine. Za sjemenje 0,1 ml ili manje, tekućina se razrijedi destiliranom (sterilnom) vodom. Dosljedno pripremite desetke razrjeđenja. 1 ml svakog od njih dodano je u dvije Petrijeve posude.

Razrjeđenja su napunjena hranjivim agarom. Mora se prethodno rastopiti i ohladiti na 45 stupnjeva. Nakon aktivnog miješanja, medij je ostavljen na vodoravnoj površini da se skrutne. Na 37 stupnjeva. usjevi se uzgajaju tijekom dana. razmatrati metoda mikrobiološkog istraživanja voda omogućuje uzimanje u obzir rezultata na onim šalicama gdje je broj kolonija u rasponu od 30 do 300.

zrak

Smatra se tranzitnim medijem za mikroorganizme. Glavno metode mikrobiološkog istraživanja zraka sedimentacija (sedimentacija) i aspiracija.

Mikroflora zračnog prostora uvjetno je podijeljena u varijablu i konstantu. Prva uključuju kvasac, pigmente koji stvaraju cocci, sporiferni bacili, štapići i drugi mikroorganizmi, otporni na sušenje, izlaganje svjetlu. Predstavnici varijabilne mikroflore, prodirući u zrak iz stalnog habitualnog staništa, ne traju duže od njihove održivosti.

U zraku velikih megaštita mikroorganizmi su mnogo više nego u zračnom okruženju ruralnih područja. Iznad mora, šume bakterija su vrlo malo. Čišćenje zraka olakšava oborina: snijeg i kiša. U zatvorenim prostorima mikroba mnogo više nego na otvorenim prostorima. Njihova količina raste u zimskom razdoblju u odsustvu redovitog emitiranja.

sedimentacija

ovo metoda mikrobiološkog istraživanja u mikrobiologiji smatra se najjednostavnijim. Temelji se na taloženju kapljica i čestica na površini agara u otvorenom Petrijevu zdjelu pod djelovanjem gravitacije. Metoda sedimentacije ne točno određuje broj bakterija u zraku. Činjenica je da je na otvorenoj šalici uhvatiti male frakcije prašine i bakterijskih kapi vrlo teško. Na površini su uglavnom velike čestice zadržane.

Ova metoda se ne koristi u analizi atmosferskog zraka. Ovo okruženje karakterizira velika fluktuacija brzine strujanja zraka. Sedimentacija se, međutim, može koristiti u odsutnosti sofisticiranih instrumenata ili izvora električne energije.

Određivanje mikrobnog broja provodi se prema metodi Omelyansky. U skladu s tim, 5 minuta na površini agara površine od 100 četvornih metara. cm poravnava broj bakterija prisutnih u 10 litara zraka.

Redak 535 "O objedinjavanju mikrobioloških metoda istraživanja"

Bakteriološka analiza zauzima važno mjesto u složenim kliničkim i laboratorijskim aktivnostima usmjerenim na dijagnostici, prevenciji i liječenju raznih zaraznih bolesti. Međutim, oni nisu ograničeni na istraživanje okoliša.

Od posebne je važnosti bakteriološka analiza biološkog materijala u medicinskim ustanovama. Istraživanja provedena u zdravstvenim ustanovama poduzimaju se zahtjevi podignuti. Svrha je Reda "Ujedinjavanje mikrobioloških metoda istraživanja" poboljšati bakteriološku analizu, poboljšati kvalitetu i učinkovitost mikrobiološke dijagnoze.

Mikroskopski pregled mrlja za žene

To je ključna metoda analize za dijagnozu infekcije, spolno prenosive bolesti, i oportunističkih infekcija (oportunističkih bakterija).

Mikroskopska analiza omogućuje procjenu kvalitativnog i kvantitativnog sastava mikroflore, provjeru ispravnosti uzorkovanja. Na primjer, prisutnost vaginalnog epitela u kuglici uzeti iz cervikalnog kanala ukazuje na kršenje pravila odabira biološki test.

Vrijedno je reći da mikrobiološki pregled u ovom slučaju općenito prati određene probleme. Oni se odnose na činjenicu da je u donjem genitalnom traktu obično je prisutan raznolik mikrofloru koja varira kod različitih dobnih skupina. Da bi se poboljšala učinkovitost studije, razvijena su jedinstvena pravila.

Dijagnoza virusnih infekcija

Ona se provodi metodama detekcije RNA i DNA patogena. Temelji se uglavnom na određivanju nukleotidnih sekvenci u patološkom materijalu. Za to se koriste molekularne sonde. Oni su umjetno proizvedene nukleinske kiseline komplementarne virusnim kiselinama označenim radioaktivnom oznakom ili biotinom.

Posebna značajka metode je višestruko kopiranje specifičnog fragmenta DNA, koji uključuje nekoliko stotina (ili desetaka) parova nukleotida. Mehanizam replikacije (kopiranja) je taj da završetak može započeti samo u nekim blokovima. Da bi ih stvorili koriste se primeri (primeri). Oni su sintetizirani oligonukleotidi.

PCR dijagnostika (lančana reakcija polimeraze) je jednostavna za izvođenje. Ova metoda omogućuje brzo dobivanje rezultata pomoću male količine patoloških materijala. Pomoću PCR dijagnostike otkrivaju se akutne, kronične i latentne (skrivene) infekcije.

S osjetljivošću se smatra da je ova metoda poželjna. Međutim, testni sustavi trenutačno nisu dovoljno pouzdani, pa PCR dijagnostika ne može u potpunosti zamijeniti tradicionalne metode.