Serološke reakcije: vrsta, uporaba

Laboratorijska dijagnoza gotovo svih infektivnih bolesti temelji se na otkrivanju antitijela u krvi pacijenta, koja su razvijena za antigene patogena, metodama seroloških reakcija. Ušao je u medicinsku praksu s kraja devetnaestog - početkom dvadesetog stoljeća.

Razvoj znanosti pomogao je odrediti antigenu strukturu mikroba i kemijske formule njihovih toksina. To je omogućilo stvaranje ne samo terapijskih, već i dijagnostičkih seruma. Dobiveni su uvođenjem oslabljenih patogena u laboratorijske životinje. Nakon nekoliko dana izlaganja krvi zečeva ili miševa, pripravci koji se koriste za identifikaciju mikroba ili njihovih toksina pripravljeni su serološkim reakcijama.

Vanjska manifestacija takve reakcije ovisi o uvjetima njegove formulacije i o stanju antigena u pacijentovoj krvi. Ako su čestice mikroba netopljive, tada se istaložavaju, liziraju, vežu ili imobiliziraju u serumu. Ako su antigeni topljivi, pojavljuje se fenomen neutralizacije ili taloženja.

Reakcija aglutinacije (PA)

Aglutinacija serološke reakcije vrlo je specifična. Jednostavno je u izvršenju i dovoljno je jasno da brzo određuje prisutnost antigena u serumu pacijenta. Koristi se za utvrđivanje reakcije Vidala (dijagnoza tifusa i paratifida) i Veigl (Tifus).

Temelji se na specifičnoj interakciji između ljudskih protutijela (ili aglutinina) i mikrobnih stanica (aglutinogeni). Nakon njihove interakcije nastaju čestice koje se talože. Ovo je pozitivan znak. Za formulaciju reakcije, žive ili ubijene mikrobne tvari, gljive, protozoe, krvne stanice i somatskih stanica.

Kemijski, reakcija je podijeljena u dvije faze:

1. Specifični spoj protutijela (AT) s antigenom (AH).
2. Nespecifično - taloženje konglomerata AG-AT, tj. Stvaranje aglutinata.

Reakcija indirektne aglutinacije (RPHA)

Ova reakcija je osjetljivija od prethodnog. Koristi se za dijagnosticiranje bolesti uzrokovanih bakterijama, unutarstaničnim parazitima, protozoama. Tako je specifično da može otkriti čak i vrlo nisku koncentraciju protutijela.

Da bismo ga proizvodili, koristimo eritrocite pročišćenog janjadi i crvene krvne stanice osobe, pretrpane antitijelima ili antigenom (to ovisi o tome što laboratorijski tehničar želi pronaći). U nekim slučajevima, humani eritrociti se tretiraju imunoglobulinom. Smatra se da se serološke reakcije eritrocita odvijaju ukoliko se nanose na dno cijevi. Pozitivna reakcija može se reći kada su stanice raspoređene u obliku obrnutog kišobrana, zauzimajući cijelo dno. Negativna reakcija se broji ako su se crvene krvne stanice nakupile u stupcu ili u obliku gumba u sredini dna.

Reakcija taloženja (RP)

Serološke reakcije ovog tipa služe za otkrivanje vrlo malih čestica antigena. To mogu biti, na primjer, proteini (ili njihovi dijelovi), proteinski spojevi s lipidima ili ugljikohidratima, dijelovi bakterija, njihovi toksini.

Seraje za reakciju dobivaju se umjetnim inficiranjem životinja, obično zečeva. Ova metoda može primiti apsolutno bilo koji precipitacijski serum. Postavljanje seroloških reakcija taloženja slično je mehanizmu djelovanja na reakciju aglutinacije. Protutijela sadržana u serumu kombiniraju se s antigenom u koloidna otopina, formirajući velike molekule proteina koji se taložu na dnu cijevi ili na supstrat (gel). Ova metoda se smatra vrlo specifičnim i može otkriti čak i zanemarive količine tvari.

Koristi se za dijagnosticiranje kuga, tularemije, antraksa, meningitisa i drugih bolesti. Osim toga, sudjeluje u forenzičnom liječničkom pregledu.

Reakcija taloga gume

Serološke reakcije mogu se izvesti ne samo u tekućem mediju, već također i u agarnom gelu. To se naziva difuzna oborina. Sa svojom pomoći, proučava se sastav složenih antigenskih smjesa. Ova metoda temelji se na kemotaksiji antigena protutijelima i obratno. U gelu se kreću jedni prema drugima pri različitim brzinama, a, sastanak, oblikuju oborinske vodove. Svaka linija je jedan skup AG-AT.

Reakcija neutralizacije egzotoksina s antitoxinom (PH)

Antitoični serumi mogu neutralizirati učinak egzotoksina koji proizvodi mikroorganizme. Ovo je osnova za ove serološke reakcije. Mikrobiologija koristi ovu metodu za titriranje seruma, toksina i toksoida, kao i određivanje njihove terapeutske aktivnosti. Neutralizacija toksina određena je konvencionalnim jedinicama - AE.

Osim toga, zbog ove reakcije, moguće je odrediti vrstu ili vrstu pripadanja egzotoksinu. Ovo se koristi za dijagnozu tetanusa, difterije, botulizma. Istraživanje se može provesti i "na staklu" i u gelu.

Reakcija lize (RL)

Imunološki serum, koji ulazi u tijelo pacijenta, ima, pored svoje glavne funkcije pasivni imunitet, također svojstva liziranja. Može se otopiti mikroorganizmi, stanični strani elementi i virusi koji ulaze u tijelo pacijenta. Ovisno o specifičnosti protutijela koja sadrže serum, izolirani su bakteriolizini, citolizini, spirohetholizini, hemolizini i drugi.

Ta specifična antitijela nazivaju se "komplement". Sadržan je u gotovo svim tjelesnim tekućinama, ima složenu strukturu proteina i izuzetno je osjetljiva na groznicu, trešenje, kiselinu i izravnu sunčevu svjetlost. Ali u suhom stanju može zadržati svojstva lizanja do šest mjeseci.

Postoje vrste seroloških reakcija ove vrste:

- bakterija Bakterioliza;

- hemoliza.

Bakterijaliza se provodi pomoću pacijentovog krvnog seruma i specifičnog imunosnog seruma sa živim mikroorganizmima. Ako postoji dovoljna količina komplementa u krvi, istraživač će vidjeti bakterijsku lizu, a reakcija će se smatrati pozitivnom.

Druga serološka reakcija krvi je da se bolesnikova eritrocitna suspenzija liječi serumom koji sadrži hemolizine, koji se aktiviraju samo u prisutnosti određenog komplimenta. Ako postoji, laboratorijski asistent promatra otapanje crvenih krvnih stanica. Ova reakcija je naširoko korištena u modernoj medicini kako bi se utvrdio titar kompleksa (tj. Njegova najmanja količina koja izaziva lizu crvenih krvnih stanica) u krvnom serumu i za analizu vezivanja komplementa. Ovako se provodi serološki odgovor na sifilis - Wassermanova reakcija.

Reakcija fiksacije komplementa (RCC)

Ova se reakcija koristi za otkrivanje antitijela antitijela u krvnom serumu pacijenta, kao i identificiranje patogena iz antigene strukture.

Do sada smo opisali jednostavne serološke reakcije. RSK se smatra kompleksnom reakcijom, budući da ne djeluje međusobno s dvjema, ali s tri elementa: antitijela, antigena i komplementa. Njegova je bit u činjenici da interakcija između antitijela i antigena događa se samo u prisutnosti proteina komplementa, koji su adsorbirani na površini formiranog AG-AT kompleksa.

Sami antigeni, nakon dodatka komplementa, prolaze kroz značajne promjene, što ukazuje na kvalitetu reakcije. To može biti liza, hemoliza, imobilizacija, baktericidna ili bakteriostatska aktivnost.

Sama reakcija se događa u dvije faze:

1. Stvaranje kompleksa antigen-antitijela, koji je vizualno nevidljiv istraživaču.
2. Promjena antigena pod djelovanjem komplementa. Ova se faza često može pratiti golim okom. Ako vizualni odgovor nije vidljiv, upotrijebite dodatni sustav indikatora koji vam omogućuje otkrivanje promjena.

Pokazatelj sustava

Ova reakcija temelji se na vezivanju komplementa. Jedan sat nakon DSC formulacije, pročišćeni eritrocita ovaca i hemolitički serum koji ne sadrži komplement se dodaju u epruvetu. Ako konjugirani komplement ostaje u epruvetama, pridružit će se kompleksu AG-AT koji se sastoji od mesnih krvnih stanica krvi i hemolizina i uzrokuje njihovo otapanje. To će značiti da je RCC negativan. Ako crvene krvne stanice ostanu netaknute, tada je reakcija pozitivna.

Reakcija hemaglutinacije (RGA)

Postoje dvije temeljno različite reakcije hemaglutinacije. Jedan od njih je serološki, koristi se za određivanje krvnih skupina. U tom slučaju, eritrociti djeluju u interakciji s protutijelima.

Druga reakcija se ne odnosi na serološke, budući da crvene krvne stanice reagiraju s hemaglutininima koji su proizvedeni virusima. Budući da svaki agent djeluje samo na specifične eritrocite (piletina, janjetina, majmun), tada se ova reakcija može smatrati usko specifičnim.

Shvatiti, pozitivna reakcija ili negativna, moguće je mjesto krvnih stanica na dnu ispitne cijevi. Ako im se slika podsjeća na obrnuti kišobran, onda je željeni virus prisutan u pacijentovoj krvi. A ako su sve crvene krvne stanice formirane poput kolumne, tada nema nepoznatih patogena.

Reakcija inhibicije hemaglutinacije (RTGA)

To je vrlo specifična reakcija koja vam omogućuje da odredite vrstu, vrstu virusa ili prisutnost specifičnih protutijela u serumu pacijenta.

Njegova je bit u činjenici da protutijela koja se dodaju u ispitnu epruvetu s testnim materijalom spriječavaju taloženje antigena na crvenim krvnim stanicama čime se zaustavlja hemaglutinacija. Ovo je kvalitativna indikacija prisutnosti u krvi specifičnih antigena određenom željenom virusu.

Reakcija imunofluorescencije (RIF)

Reakcija se temelji na sposobnosti detekcije AG-AT kompleksa fluorescentna mikroskopija nakon njihovog tretmana s fluorokromnim bojama. Ova metoda je jednostavna za rukovanje, ne zahtijeva raspodjelu čiste kulture i traje malo vremena. To je neophodno za brzu dijagnostiku zaraznih bolesti.

U praksi, ove serološke reakcije podijeljene su u dvije vrste: izravne i neizravne.

RIF izravno proizvesti antigen koji su prethodno obrađeni fluorescentnog seruma. I neizravno je da se lijek prvo tretira s konvencionalnim diagnosticum sadrži antitijela na željeni antigen i zatim ponovno primijeniti fluorescentni sirutke, koja je specifična za proteinima složenog K-AT i mikrobne stanice postanu vidljivi mikroskopijom.